《镖行天下之走单骑》故事发生在明朝。一场血腥的屠杀震惊了京城。大屠杀唯一的幸存者是富豪周奎夫（闵政饰）的女儿采儿（王莎莎饰）。临死前，周奎夫给采儿吹了个柳哨，让她去找世界安全局的汪振伟（周群达饰），希望汪振伟能护送采儿回山西老家，揭发将事情的真相告诉了族长。原来，这一切的幕后主谋，是采儿的继母玉观音（孟广美饰）。她所谓的意图是侵占周奎夫的全部财产。途中，采儿幸运地遇到了同样要去山西的王振伟。彩儿和她的孩子们伪装成男人，老少同走。谁知一路上险情不断，层出不穷的刺客指着采儿。最终，两人顺利抵达目的地，却意外落入了玉观音设下的另一个陷阱。